让您一目了然做实验-纳氏试剂分光光度法测氨氮的操作过程
一、检测原理
以游离态的氨或铵根离子等形式存在的氨氮与纳氏试剂反应生成淡红棕色络合物，该络合物的吸光度与氨氮含量成正比，于420nm波长处测量。
二、实验步骤
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1 |
移取标准溶液、待测溶液定容至50毫升 |
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2 |
分别加入1.0mL酒石酸钾钠或矿物质稳定剂2滴 |
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3 |
加入以二氯化汞为原料的纳氏试剂1.5mL或以碘化汞为原料的纳氏试剂1.0mL |
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4 |
混匀后静置10min |
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5 |
10mm比色皿，在420nm波长下，以水作参比测试吸光度 |
三、线性空白值偏高的常见问题原因分析及解决方案
1、用1cm比色皿时的空白吸光度空白值偏高，大于0.030，导致线性不好或截距偏大。
原因分析：
(1)试剂纯度（所用试剂含铵盐，如酒石酸钾钠）；
(2)试验用水被污染，引入氨或者铵盐。
解决方案：
(1)用矿物质稳定剂代替酒石酸钾钠；
(2)在无氨条件下制水并密封储存，或者使用高质量新鲜的蒸馏水代替无氨水，并且在实验前测试空白吸光度低于0.030方可使用。
2.显色温度的控制
冬季室温往往较低，如室温介于5-10℃时显色会不完全；而温度在20-25℃时显色最完全且较稳定；温度超过30℃，显色不稳定且极易褪色，导致吸光度偏低。所以显色温度应控制在20-25℃之间。
3.显色时间的控制
3.1 纳氏反应时间小于10min，反应不充分；10-30min反应相对稳定；30-45min显色会相应加深；大于45min，显色会处于减退状态。因此应控制反应时间在10-30min。
3.2 显色完全后应尽快测定，防止颜色加深或褪色影响吸光度。
4.比色皿的尺寸选择和吸附
4.1 根据样品的浓度可以选择10mm或者20mm的比色皿，选择10mm比色皿时，空白吸光度应该小于0.03，相应地，选择20mm比色皿时，空白吸光度应该小于0.06。
4.2 高浓度在比色皿中的吸附尤其明显，可能导致测定结果偏高。尽量按浓度从低到高的顺序测定，尤其是测标曲时；
4.3 为了准确测定，测样前用蒸馏水冲洗比色皿3遍以上再测定，以减少吸附产生的误差；
4.4 测定完成后，比色皿上壁上如仍有吸附物，应将比色皿放在铬酸洗液或稀硝酸中浸泡片刻，再进行冲洗后备用。
5.显色剂用量对测定结果的影响
表1
纳氏试剂加入量(氯化汞)对空白值和2mg/L标液吸光度的影响
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纳氏试剂加入量(mL) |
0.5 |
1 |
1.5 |
2 |
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2mg/L标液吸光度(Abs) |
0.622 |
0.622 |
0.679 |
0.707 |
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空白吸光度(Abs) |
0.009 |
0.026 |
0.030 |
0.046 |
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2mg/L标液扣空白后吸光度(Abs) |
0.613 |
0.642 |
0.649 |
0.661 |
从表1可知，随着纳氏试剂加入量增大，空白值会变高。应按照国标方法要求加入合适体积的纳氏试剂。
6.纳氏试剂的使用与储存
6.1纳氏试剂使用前需恒温至室温，且使用前不可摇匀，应吸取上清液使用。纳氏试剂在生产配制后也需静置进行沉淀。
6.2纳氏试剂的使用选择，根据HJ 535-2009，市面上氯化汞和碘化汞两种原料的纳氏试剂均可使用，如图1所示。
