动物源性食品中抗病毒类药物残留量测定的前处理方法

动物源性食品中抗病毒类药物残留量测定的前处理方法

抗病毒类药物的危害及检测目的

抗病毒类药物主要包括金刚烷胺、金刚乙胺、美金刚、吗啉胍等金刚烷胺和金刚乙胺是第一批被允许用来治疗A型禽流感病毒的特效药,两者都属于穿入和脱壳抑制剂,抑制病毒的繁殖。研究发现,金刚烷胺可以引起角膜水肿,高剂量摄入时表现出一定的毒性美金刚和金刚乙胺互为同分异构体,但其性质和作用机理却并不相同。美金刚原被广泛用于中枢神经系统的治疗,具有一定的神经毒性吗啉胍又被称为病毒灵,是一种广谱抗病毒类药物,对甲型和乙型流感病毒、副流感病毒、鼻病毒、呼吸道合胞体病毒等有较好的治疗效果剂量过大会引起多汗、恶心、低血糖等不良反应我国在199912月将吗啉胍列为禁用药,2005年中华人民共和国农业部第560号公告将金刚烷胺、金刚乙胺、利巴韦林和吗啉胍这4种抗病毒类药物列为禁用兽药,禁止用于动物生产。虽然抗病毒药属动物禁用药物但其在动物养殖过程中依然广泛使用。若饲养者不科学、不合理地使用该药物易导致药物在畜禽机体内残留与富集不仅会造成畜禽中毒也会引起病毒耐药毒株的出现使抗病毒药物有效性降低其耐药性也有转移扩散到人体的风险对消费者的健康存在很大的隐患。

本文阐述了如何将抗病毒类药物从样品基质中分离提取出来,并经过净化后,转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为重点,依据行标SN/T 4253-2015,为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目:金刚乙胺、金刚烷胺、美金刚、吗啉胍、咪喹莫特、奥司他韦、阿昔洛韦

应用范围:鸡肉、鸡肉制品、猪肉、肝脏、鱼、虾、蛋、皮蛋等动物组织

液相色谱-质谱/质谱法

方法原理:试样中7种抗病毒类药物用三氯乙酸-乙腈混合溶液提取并沉淀蛋白,经混合型阳离子交换固相萃取柱净化后,液相色谱-质谱/质谱仪测定,内标法定量。

前处理仪器:分析天平(感量0.1 mg0.01 g);组织捣碎机、高速冷冻离心机4 ℃冷冻,18000 r/min;离心机5000 r/min;涡旋混合器;pH计;氮吹仪;固相萃取装置。

检测仪器:HPLC-MS/MS+ESI

试样制备与保存

鸡肉、肝脏、鱼肉放在组织捣碎机均质,充分混匀,均分成2份,分别装入清洁容器内,并标明标记;鸡肉制品取鸡肉部分;蛋、虾去壳后取可食部分放在组织捣碎机均质,充分混匀,均分成2份,分别装入清洁容器中,并标明标记。

制样操作过程中,应尽可能防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

试样于-18 以下保存,新鲜或冷冻的组织样品可在2 6 贮存72 小时。

 

前处理方法

1.提取

称取试样5 g(精确至0.01 g)于50 mL离心管中,加入0.1 mL内标标准工作溶液(0.1 μg/mL),加入15 mL三氯乙酸乙腈(90+10)溶液,加盖后在超声波发生器中超声10 min,再旋涡混匀3 min4 ℃条件下15000 r/min离心5 min,取出上清液,再加入10 mL三氯乙酸乙腈溶液重复提取一次,离心后合并上清液至25 mL的容量瓶中,用乙腈定容至刻度。

2.净化

分别用3 mL甲醇、3 mL水和3 mL2 %甲酸水溶液活化混合阳离子交换固相萃取小柱(60 mg3 mL),准确移取5 mL上清液加入到小柱中,依次用5 mL2 %甲酸水溶液和3 mL 1 %甲酸乙腈淋洗,弃去全部流出液;然后真空抽干小柱5 min,用4.0 mL洗脱溶液(氨水乙酸铵甲醇2.5+2.5+95)洗脱至10 mL玻璃管中,在50 ℃用氮气浓缩仪吹至近干。准确加入1.0 mL乙腈-甲醇-水溶液(70+10+20)溶解残渣,涡旋30 s后过0.2 μm滤膜,供液质测定。此样液应在48 h内测定完毕。

 

注意事项

1.标准物质分别用甲醇配制成100 μg/mL的标准储备液,其中阿昔洛韦先用少量二甲基亚砜溶解,再用50 %甲醇水配成100 μg/mL的标准储备液,在-18 避光保存,可使用6个月。

2.本方法使用了金刚烷胺D6、美金刚D6、阿昔洛韦D4同位素内标进行回收率的校正。

3.本方法使用三氯乙酸-乙腈提取并沉淀蛋白,MCX固相萃取柱净化

4.MCX固相萃取柱的净化过程是“酸上样、碱洗脱”。淋洗后一定抽干小柱,防止水相进入洗脱液。氨化洗脱液一定要现用现配,防止氨水挥发,导致目标化合物洗脱不下来。

5.氮气浓缩过程中,吹至近干潮湿状态,定容后采取涡旋加超声的方式复溶,可以提高回收率。

6.金刚烷胺的残留检测,有GB 31660.5-2019作为依据,应根据需求进行选择使用。并注意其他药物检测方法的更新。

 

参考文献

SN/T 4253-2015 出口动物组织中抗病毒类药物残留量的测定 液相色谱质谱/质谱法


 1 抗病毒类药物残留量测定的前处理流程图


相关标准物质
商城编码 产品名称 标准值 规格 CAS号 有效期 库存 数量 操作
97.4%
1mg
1219805-53-4
2025-03-12
8
≥98.0%
100mg
768-94-5
2025-10-30
≥10
1000μg/mL
1.2mL
768-94-5
2025-06-19
≥10
100μg/mL
1mL
1219805-53-4
2025-09-12
≥10
100μg/mL
1mL
768-94-5
2025-05-08
≥10
≥98.0%
100mg
1501-84-4
2028-02-28
7
见证书
1mg
33830-10-3
2026-09-25
≥10
≥98.0%
100mg
665-66-7
2027-02-20
7
100μg/mL
1mL
1189713-18-5
2024-10-12
≥10
1000μg/mL
1mL
1501-84-4
0
100μg/mL
1mL
33830-10-3
2025-06-13
≥10
≥98.0%
10mg
1501-84-4
2028-05-22
≥10
≥98.0%
10mg
665-66-7
2028-03-06
9
≥98.0%
10mg
768-94-5
2024-07-03
4
见证书
10mg
33830-10-3
0
100μg/mL
1mL
350818-67-6
0