【一文解决】氯丙嗪残留测定前处理方法

猪肾和肌肉组织中氯丙嗪残留量测定的前处理方法

氯丙嗪的危害及检测目的 

氯丙嗪属于吩噻嗪类药物,可作用于中枢神经系统,故被作为中枢多巴胺受体的阻断剂,具有镇静、催眠、镇吐、抗晕眩等功效。当前,氯丙嗪常被一些养殖户违规添加至家畜饲料中,目的是通过抑制家畜运动来达到“短期育肥”的效果。或在家畜长途运输过程中减少其应激反应,进而降低死亡率。氯丙嗪药物的滥用造成其在动物体内大量残留,并通过食物链进入人体,长期蓄积会引发人体食物中毒、肝脏和肾脏病变等,直接危害人体健康。目前,欧盟明令规定“不得在动物源性食品中检出氯丙嗪”。我国也对氯丙嗪进行了严格的限制,2020年生效实施的GB 31650-2019《食品安全国家标准 食品中兽药最大残留限量》中规定了氯丙嗪允许作治疗使用,但不得在动物性食品中检出。

本文阐述了如何将氯丙嗪从样品基质中分离提取出来,并经过净化后,转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为重点,依据国标GB/T 20763-2006,为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。


检测项目:氯丙嗪

——————应用范围:猪肾/肌肉组织——————

液相色谱-串联质谱法

方法原理:氯丙嗪在碱性条件下用特丁基甲醚提取,并通过向提取液中加入磷酸盐缓冲液(pH =3),使氯丙嗪被提取到缓冲溶液中,并用特丁基甲醚净化缓冲溶液,改变缓冲溶液为碱性,将氯丙嗪反提取到特丁基甲醚中,浓缩,定容。供液相色谱-串联质谱仪测定,外标法定量。


前处理仪器:电子天平(感量0.1 mg和0.1 g);离心机(最大转速为10000 r/min);离心管(锥形底玻璃离心管15 mL和10 mL具塞;锥形底聚丙烯离心管50 mL具螺旋盖);过滤器(聚四氟乙烯膜0.2 μm×13 mm;尼龙膜0.2 μm×47 mm);液体分配器(1 mL~10 mL和5 mL~50 mL);微量移吸器(10 μL~100 μL和100 μL~1000 μL);流动相过滤装置;氮气浓缩仪;高速涡流混合器;振荡器;食物调理机;一次性移液管;酸度计(测量精度为±0.02 unit);超声波仪;一次性注射器(1 mL);试样瓶(2.0 mL)。

检测仪器:HPLC-MS/MS+ESI


试样制备

猪肾要去除脂肪和其他的非肾脏组织,猪肉要去皮和骨头。将其绞碎拌匀。分出0.5 kg作为试样,将制备好的试样密封,并做上标记。将试样置于-18 ℃条件下贮存。


前处理方法

1.提取

称取试样2.00 g(精确到0.01 g)放入50 mL聚丙烯离心管中,加入200 μL乙腈进行涡流混合,混合后加入400 μL 5 mol/L氢氧化钠溶液,并进行涡流混合30 s。在(80±5)℃水浴中放置1 h。在此期间,要对每个测定样品进行两次涡流混合。1 h后,将样品从水浴中取出并冷却至室温。加入12 mL特丁基甲醚,置于振荡器上高速振荡15 min,离心15 min(转速为4000 r/min)。吸出上清液,定量将特丁基甲醚转移到干净的15 mL玻璃离心管内,待净化。

2.净化

将上述15 mL离心管中加入1 mol/L磷酸二氢钾溶液(pH=3)3 mL,振荡10 min,离心10 min(4000 r/min)。将特丁基甲醚层吸出弃去。在磷酸盐溶液中加入2 mL特丁基甲醚,振荡5 min,离心5 min(4000 r/min),吸出特丁基甲醚层,弃去。然后再在磷酸盐缓冲溶液中加入2 mL特丁基甲醚重复上述步骤。加入1 mL 5 mol/L氢氧化钠溶液摇匀后加入10 mL特丁基甲醚,振荡15 min,离心5 min(4000 r/min)。定量吸取特丁基甲醚转移到干净的10 mL离心管中。在40 ℃条件下用氮吹仪蒸发至干。在浓缩至干的提取物中加入1000 μL流动相溶液,进行涡流混合,超声处理10 min。用0.2 μm×13 mm的聚四氟乙烯注射式过滤器过滤样液,将样液转移到试样瓶中,供液相色谱-串联质谱仪测定。


国标解读

1.氯丙嗪标准物质用无水乙醇配成0.10 mg/mL的标准储备液,在2 ℃~4 ℃避光保存,有效期一年。

2.该国标通过改变提取溶液的pH值使氯丙嗪在特丁基甲醚和缓冲盐溶液之间转移,达到净化的目的。

3.移取特丁基甲醚的过程中,注意离心后轻拿轻放,保证液面分层清晰,准确取出全部有机层溶剂。

4.在氮气浓缩过程中注意控制温度不要超过40 ℃,气流在液面上方0.5 cm处缓缓吹出,随着液面下降调整气针高度,使有机溶剂吹至近干状态。

5.氮气浓缩定容后,先涡旋再超声,保证目标化合物充分溶解下来。

6.如果有条件,建议使用氯丙嗪同位素内标进行回收率的校正。


参考文献

GB/T 20763-2006 猪肾和肌肉组织中乙酰丙嗪、氯丙嗪、氟哌啶醇、丙酰二甲氨基丙吩噻嗪、甲苯噻嗪、阿扎哌隆、阿扎哌醇、咔唑心安残留量的测定 液相色谱―串联质谱法


  

图1 猪肾和肌肉组织样品中氯丙嗪残留量测定的前处理流程图


坛墨质检-氯丙嗪标准物质信息表



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相关标准物质
商城编码 产品名称 标准值 规格 CAS号 有效期 库存 数量 操作
100μg/mL
1mL
50-53-3
0
1000μg/mL
1mL
50-53-3
2026-03-17
≥10
≥98.0%
250mg
69-09-0
2026-08-28
1
≥98.0%
10mg
1228182-46-4
2025-08-23
≥10
100μg/mL
1.2mL
50-53-3
2025-08-16
≥10
100μg/mL
1mL
69-09-0
2026-02-24
≥10
1000μg/mL
1.2mL
69-09-0
2024-10-22
≥10
见证书
100mg
1228182-46-4
0
467
见证书
50mg
969-99-3
0
≥98.0%
10mg
69-09-0
2026-08-27
≥10
≥98.0%
100mg
69-09-0
2026-11-19
≥10